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siRNA套餐

吉玛为了回馈广大客户对本公司的鼎力支持,特推出RNAi系列优惠套餐,供广大新老客户选择。

产品描述

吉玛为了回馈广大客户对本公司的鼎力支持,特推出RNAi系列优惠套餐,供广大新老客户选择。

有效性承诺

客户只需提供基因序列GeneID或者Accession number, 我们免费帮您设计选择合适的位点,siRNA oligo 细胞转染效率达到70%以上,我们可以保证至少有一对可以有效的抑制相应基因(mRNA)的表达,抑制效率可达70%(下限偏差不超过5%).



目录号 产品名称 规格 纯化方式 价格 交货期限
A10001 普通siRNA经济型套餐-A 1 套 HPLC ¥1,680 6个工作日
A10002 普通siRNA实惠型套餐-B 1 套 HPLC ¥2,300 6个工作日
A10003 化学修饰siRNA经济型套餐-C 1 套 HPLC ¥1,980 6个工作日
A10004 化学修饰siRNA实惠型套餐-D 1 套 HPLC ¥2,600 6个工作日
A10005 荧光修饰siRNA经济型套餐-E 1 套 HPLC ¥2,580 6个工作日
A10006 荧光修饰siRNA实惠型套餐-F 1 套 HPLC ¥3,200 6个工作日
 
普通siRNA经济型套餐A 优惠价¥1680
套餐内容 规格 纯化方式
目的基因siRNA oligos 3对(3×2 OD) HPLC
阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
FAM标记阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
阳性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC

普通siRNA实惠套餐B优惠价¥2300
套餐内容 规格 纯化方式
目的基因siRNA oligos 4对(4×4 OD) HPLC
阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
FAM标记阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
阳性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC

化学修饰siRNA经济套餐C优惠价¥1980
套餐内容 规格 纯化方式
目的基因siRNA oligos 3对(3×2 OD) HPLC
阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
FAM标记阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
阳性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC

化学修饰siRNA实惠套餐D优惠价¥2600
套餐内容 规格 纯化方式
目的基因siRNA oligos 4对(4×4 OD) HPLC
阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
FAM标记阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
阳性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC

荧光修饰siRNA经济套餐E优惠价¥2580
套餐内容 规格 纯化方式
目的基因siRNA oligo 3对(3×2 OD) HPLC
阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
FAM标记阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
阳性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC

荧光修饰siRNA实惠套餐F 优惠价¥3200
套餐内容 规格 纯化方式
目的基因siRNA oligos 4对(4×4 OD) HPLC
阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
FAM标记阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
阳性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC

in vivo 化学修饰siRNA经济套餐G优惠价¥2880(全链甲氧修饰,末端胆固醇修饰)*
套餐内容 规格 纯化方式
目的基因siRNA oligos 3对(3×2 OD) HPLC
阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
FAM标记阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
阳性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC

in vivo 化学修饰siRNA实惠套餐H 优惠价¥3500(全链甲氧修饰,末端胆固醇修饰)*
套餐内容 规格 纯化方式
目的基因siRNA oligos 4对(4×4 OD) HPLC
阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
FAM标记阴性对照siRNA oligo 1对(1×1 OD) HPLC
阳性对照siRNA oligos 1对(1×1 OD) HPLC
* 此套餐使用适于体内实验的修饰方法,但由个体差异、基因模型种类、人为操作及体内代谢代偿等多种不确定因素影响,in vivo化学修饰siRNA套餐仅保证在细胞RNA水平qPCR检测干扰效果。(套餐中某一条序列对靶基因有直接作用效果。)


功能介绍与实验实例

siRNA Real-Time PCR结果分析

对于RNAi实验而言,我们通常需要知道的是某一特定细胞在导入siRNA前后某一特定基因的表达变化情况来判断siRNA起到了Gene Knockdown作用。应用荧光定量PCR的方法,可以通过两种途径来实现上述判断,一是测定特定细胞在导入siRNA前后某一特定基因mRNA数量的变化,即为绝对定量;二是通过检测特定基因与某一管家基因在在导入siRNA前后相对表达情况的变化,即为相对定量。通常采用相对定量的方法来检测siRNA的Gene Knockdown作用。

1.Real-Time PCR 实验设计

Real-Time PCR实验设计时应包括实验组(导入siRNA),阴性对照(Negative Control)和Mock Transfection三组。每组至少三个重复。各组同时检测目标基因和管家基因的Ct值。下例中以GAPDH为管家基因。



2.Real-Time PCR得到siRNA导入前后目标基因和管家基因的Ct值

各组重复实验的Ct值差异不能过大;一般地,重复实验Ct值差异在1以内是可以接受的。



实验组 阴性对照(NC) Mock Transfection
Target Gene GAPDH Target Gene GAPDH Target Gene GAPDH
30.40 23.63 24.21 22.66 26.21 24.60
30.35 23.40 24.60 22.56 26.15 24.31
30.41 23.52 24.66 22.48 26.35 24.72


3.Real-Time PCR数据分析

以Mock Tansfection为对照(Calibrator),管家基因为Normalizer,ΔΔCt=(Ct目的基因-Ct管家基因)实验组-( Ct目的基因- Ct管家基因)对照

Target Gene GAPDH ΔCt ΔΔCt Target Gene

Average Ct Average Ct Target Gene–GAPDH ΔCt–ΔCt, Mock Rel. to Mock
Mock 26.24±0.10 24.54±0.21 1.7±0.21 0.00±0.21 1.0(1.16-0.86)
实验组 30.39±0.09*1 23.51±0.15*2 6.88±0.17*3 5.18±0.17 0.027(0.0240.031)
NC 24.49±0.24 22.56±0.09 1.93±0.25 0.23±0.25 0.85(0.71-1.01)
注:*1 为同一样本重复实验的Ct值的标准偏差,可用Excel 计算得到; 
*2 计算公式为 ,例如 =0.17
*3 计算公式为2△△Ct+S 和2△△CtS,S为△△Ct的标准偏差,例如 2(2.5+0.10) =5.3


使用方法



A.siRNA转染的方法

哺乳动物转染的常见方法有:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法(例如,显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂,其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。

应用脂质体型转染试剂进行转染需要注重的几个方面:转染试剂的用量、siRNA的用量、转染时的细胞密度、转染时的操作顺序、细胞与转染试剂/siRNA复合物的温浴的时间


B.Lipofectamin2000 转染试剂

选择最适合的转染试剂和转染条件,往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子。Lipofectamin2000适用于核酸的体内和体外操作,可应用于DNA、RNA、反义寡核苷酸、siRNA的转染,也可应

用于DNA/siRNA的共转染操作;是一种新型的高效siRNA转染试剂。


Lipofectamin2000的应用领域:

1、原代培养细胞和转化细胞株的基因转染
2、siRNA高通量转染试验
3、DNA转染;DNA和siRNA的共转染
4、核酸(siRNA、DNA、RNA)的体内导入试验
5、贴壁细胞和悬浮细胞转染


Lipofectamin2000 的特点: 

1、不必更换培养基,操作简便易行,可在半小时内完成操作
2、在含血清培养基中也能表现高转染效率
3、细胞毒性低;适用细胞广泛
4、即用型试剂,可在含有抗生素的完全培养基中转染
5、基于脂质的转染试剂,确保没有RNAse活性
6、可介导siRNA高转染细胞及体内siRNA的高效导入


C. Lipofectamin2000适用的细胞类型

Lipofectamin2000转染试剂可广泛应用于多种细胞系的DNA和siRNA转染如:HeLa(人颈部癌细胞)、MCF-7(人乳房癌细胞)、Hep3B(人肝细胞癌细胞)、COS-7(猴肾细胞)、Neuro-2a(鼠神经母细胞瘤细胞)、NIKS(人角质化细胞)、B16(鼠黑素瘤细胞)、DLD-1(人结肠癌细胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纤维细胞)、HT-29(人结肠腺癌细胞)、A549(人肺癌细胞)、CHO-k1(仓鼠卵巢细胞)和293(腺病毒5 DNA转化的人胚胎肾细胞),SVRbag4细胞等。


D.转染前细胞培养

在细胞板上培养细胞时,应使细胞汇合在24小时内达到70-90%。


E.合适的lipofectamin2000用量

合适的siRNA(DNA):lipofetamin2000比例对核酸的高效转染有重要影响;我们推荐的DNA:lipofetamin2000为1:0.5—1:5(ug:ul),siRNA:lipofectamin2000为1:0.01-1:0.1(pmol:ul)一般情况下,此范围内都可获得高的转染效率。



F.贴壁细胞转染程序

选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。

1、转染前一天,4-5´104细胞接种在24孔板上, 0.5mL含FBS和抗生素的DMEM(或Opti-MEM,其他培养基)细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞数量,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。
3、在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混匀;
4、混匀lipofectamin试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释1μl lipofectamin试剂(DNA转染时,则加入2μllipofectamin试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟;

5、将稀释好的siRNA和RNAi-Mate试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物。
6、将100μl siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物加到含有细胞和培养基的培养板的孔中,来回轻柔摇晃细胞培养板板。
7、 细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。  


G.悬浮细胞转染程序

1、转染的当天,收集细胞离心,用含FBS的培养基重悬。
2、在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清的培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混匀;
3、混匀lipofectamin试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释1μl lipofectamin试剂(DNA转染时,则加入2μl lipofectamin试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟;
4、将稀释好的siRNA和lipofectamin试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物。
5、再加入400μL细胞悬浮液(细胞数量决定于细胞类型和转染后分析测试的时间)。
6、细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。  



H.DNA和siRNA共转染细胞

1、在转染的前一天,4-5´104细胞接种在24孔板上,0.5 mL含FBS和抗生素的细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞密度,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。
3、在100μL的无血清的培养基中稀释20pmol siRNA和0.2μg DNA,加入2μl lipofectamin试剂,充分混合,放置20分钟,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin复合物。
4、将siRNA/ DNA/lipofectamin复合物加入培养基中,轻轻混匀。
5、细胞在37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它步骤。


I.siRNA体内导入方法

1、适量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的无菌水中,轻轻混匀,因为注射液体积有限,建议采用高浓度的siRNA或DNA,一般DNA为2μg /μL、siRNA为10μg /μL。
2、取适量的DNA、siRNA或siRNA\DNA复合物与lipofectamin混合。例如,在1#管中加入0.5μL的DNA(1μg)和0.5μL的siRNA(5μg),在2#管中加入0.55μL的lipofectamin(24μg)和0.45μL不含RNA酶的无菌水中,将1#管中的溶液加入2#管中,在室温下温育30分钟,以形成siRNA/DNA-lipofectamin复合物。
3、制备的siRNA/DNA-lipofectamine复合物可用于体内导入siRNA、DNA或siRNA\DNA。

产品说明书

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目录分类 本商品目录中的产品介绍按以下内容分类:

1. RNA干扰研究工具
2. MicroRNA研究工具 

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质量保证 凡吉玛公司的产品均有严格的质量保证。如果我们发现确实存在质量问题时,保证更换产品。如果在到货后一个月之内用户无提出异议,我们将视本产品为优良产品而不再受理投诉事宜。提出产品异议(或投诉)时,切莫在产品使用完(或快使用完)后提出,以备本公司回收产品,确认产品质量。由于订错产品而产生的退货情况,原则上由客户承担相关费用。发生投诉事宜时,公司只保证在产品价格额度范围之内酌情赔偿,恕不受理超过制品价格额度以上之部分。退款时需退还原始发票。

承诺保证

常规siRNA套餐(人、大、小鼠mRNA A/B/C/D/E/F 套餐):

转染效率良好的情况下(>80%),保证mRNA水平70%干扰效果(下限偏差不超过5%),无效可以免费重新提供一次靶点,如果重新合成后再次无效或退票退款或做预付款;

特殊物种或lncRNA套餐:

lncRNA或者非人鼠的其他哺乳动物的mRNA,只接受一次无效投诉,需款到后发送重合产品,如果重新合成后再次无效,则不再接受投诉处理。

针对circRNA干扰序列设计,由于其设计靶点局限性,我们针对目的基因设计3对干扰靶点。如果客户检测无效且已付款,且客户可以接受在非环化位点设计的情况下,我们可以免费重新设计3对。如果再次无效则不再免费重做。目前我们成功率大约在85%左右。(如果需要我们做验证1株细胞1个circRNA服务:验证分组3个干扰靶点组,一个阴性对照组,空白细胞组,在一株细胞验证2个时间点1万,预付5仟,如果无效,只收预付款。如果需要重新设计到该基因其他位置验证,则收取全款。如果无效也不再退款)

对于circRNA产品线,目前不保证100%一定成功。



备注:以上信息为常规承诺与处理无效信息,对于经客户与公司双方特殊约定信息除外。

所有产品仅限用于科研实验,仅针对细胞水平,体内效果由于影响因素较多,不做任何体内效果保证。




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