产品描述

RT-PCR服务简介

RT-PCR检测服务中采用SYBR Green染料法/探针法进行RT-PCR相对定量检测服务，即用已知管家基因做为内参照，根据目的基因和管家基因的相对表达作为定量的最后结果。
样品可提供组织、细胞、RNA、cDNA中的一种,对于提供样本的大致原则如下：组织样本,尽可能提供2×2×2mm3体积或以上,新鲜组织可直接提供，不需处理；对于细胞样本，尽可能提供3×106个细胞左右,加适量Trizol处理即可，确保样品适于RNA抽提。RNA、cDNA含量根据同等细胞数量的细胞抽提和逆转录大致界定。相关情况可以具体协商。样品吉玛最长保存期限为30天，也可根据客户要求在完成实验后即刻销毁或寄回客户。

RT-PCR服务内容


     1.RNA提取质量检测电泳图
 
     2.RT-PCR扩增曲线示例（三重复避免系统误差）
 
     3.RT-PCR数据分析示例（计算组内误差）
 
     4.RT-PCR结果柱状图示例（检测干扰效率）
 
     5.靶基因与内参溶解曲线图（检测扩增质量）
 
     6.DNA片段扩增质量检测电泳图


 吉玛RT-PCR服务提供的结果展示：RNA提取质量检测电泳图

收费标准：300元*基因数+70元*样本数+90元*基因数*样本数

吉玛Western-blot服务介绍

定义

Western Blot即蛋白免疫印迹，是根据抗原抗体的特异性结合检测样品中某种蛋白的方法。其利用SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，保证了快速、准确的检测，对蛋白进行定性和半定量分析。
 
原理
 
1、蛋白分离原理
 
样品在含有强还原剂的SDS溶液中加热处理后，蛋白质发生变性和解离，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物。这种复合物由于结合大量的SDS，电泳时在凝胶中的迁移率不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而主要取决于蛋白质分子量。
 
2、抗体检测原理
 
通过SDS-PAGE按照分子量大小分离蛋白质样品，转移到PVDF膜或NC膜上，以膜上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体（一抗）起免疫反应，一抗再与酶标记的抗体（二抗）起抗原抗体反应，最后底物化学发光显色检测电泳分离的特异性目的蛋白成分。

注：目的一抗另计，其余试剂免费。

对上图扫描胶片进行条带的灰度分析，得到量化的数值，并用目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品目的蛋白相对含量。

收费标准：

客户提供可以用于WB检测的组织或细胞样品；

1、每个样品每个蛋白检测费用：170元；每种蛋白抗体验证费用：400元。

2、每个蛋白一张膜：1500元；（每张膜上做一种目的蛋白和相应的内参蛋白，最多可以做到12个目的样品。一抗另计，其它试剂免费）

3、多种目的蛋白检测计费：170元*样品数*目的蛋白数+400元*蛋白数

服务周期：通常2-4周；样品数量多或蛋白表达丰度较低时，时间周期另外商议。

功能介绍与实验实例

本实验采用目的蛋白单克隆抗体来检测不同组织样本目的蛋白的表达状况。 

操作步骤 

每种组织样本加入200 ul组织细胞裂解液, 使组织完全裂解。裂解物移入离心管中。 

取5ul样本加入5ul 2×SDS-PAGE loading buffer，100ºC加热处理5分钟，冰上冷却。12000 g 离心10分钟去除不溶性沉淀。
 
样品使用10% SDS-PAGE分离，每孔上样量为20 ul。 

电泳结束后，将PVDF膜在甲醇中浸泡1分钟，再使用Transfer Buffer浸泡凝胶、滤纸和在甲醇中浸泡过的PVDF膜10分钟，然后制备转移三明治。 

使用Semi-Dry Cell进行半干电泳转移，转移条件为30 mA 60 min。 

转移完毕后，用1×Ponseau S solution染色并标记蛋白质Marker的条带位置。 

使用Blocking Buffer封闭转印膜2小时，然后用1×TBST洗涤3次，每次10分钟。 

加入适当稀释的一抗，4ºC 温育过夜。用1×TBST洗涤3次，每次15分钟。 

加入适当稀释的二抗，室温温育2小时。用1×TBST洗涤3次，每次15分钟。 

用SuperSignal West Pico Chemiluminent Substrates进行化学发光检测，并对X光片曝光。经显影定影处理后，胶片用凝胶成像分析系统拍照，使用Gel-Pro Analyzer软件分析处理。 

结果与分析(D1-D6)





注：条带从左至右共6个条带，依次为1.样品D1.2. 样品D2 .3. 样品D3 4. 样品D4 5.样品D5 6.样品D6 
表1 Western blot结果的半定量灰度分析 

使用方法

使用方法

产品说明书

相关文献

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订购须知

细胞基质黏附实验服务：CKK-8法进行检测。客户需提供：检测细胞及其培养条件和处理方法。选择观察时间点。检测包括3-5组细胞，每组3个重复。我们提供的结果包括：1细胞黏附情况照片。2（可选）酶标仪检测的原始数据与统计分析结果。具体价格敬请来电咨询。

细胞免疫荧光实验：利用抗原－抗体特异性结合的原理，用经荧光染料标记的抗体对细胞内的蛋白质进行定性或定量研究的方法。流程：细胞爬片 转染或药物处理 固定透化 封闭 一抗孵育 荧光二抗孵育 荧光显微镜观察拍照。客户需要提供荧光一抗及二抗，具体价格敬请来电咨询。

酶联吸附实验（ELISA)：4步骤帮您轻松检验各种蛋白大分子抗原：（1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。（2）加受检标本，保温反应，去除未结合物质。（3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫标抗体结合。（4）加底物显色。服务价格：检测3-5组样品，每组样品3个复孔，具体价格敬请来电咨询。

细胞迁移、侵染实验服务项目：铺有Matrigel的特殊滤膜，正常细胞不能自由穿过。在下室中加入趋化剂，上室加有经过处理的重悬肿瘤细胞，具有侵袭能力的肿瘤细胞在趋化剂诱导下开始穿膜运动，并粘附在滤膜下表面。具体价格敬请来电咨询。

细胞增殖实验使用CCK-8方法： 据活细胞线粒体内的脱氢酶可将试剂中的有效成分转变为有颜色的Formazan，并可被酶标仪检测，间接反应活细胞数量。具体价格敬请来电咨询。（包括4组细胞，每个样品3-5个复孔，客户可以选择检测时间点。）

稳定细胞株筛选服务： 1.抗生素筛选浓度确定（致死曲线）：2. 细胞接种：转染实验前天接种细胞。转染时细胞密度达到60%~80%；3. 细胞转染（脂质体）或侵染（慢病毒）4. 利用质粒抗性筛选稳定干扰细胞株；5. 目的基因干扰效果验证。 周期2-3个月，提供T25稳筛细胞株一瓶，具体价格敬请来电咨询。

miRNA靶基因预测双荧光素酶报告系统：吉玛采用promega的psicheck2.0载体系统构建靶基因3'UTR系统。该系统可检测siRNA/miRNA与靶基因的调控关系，报告荧光（hRluc)验证si/miRNA调控作用，校正荧光（hluc)检测质粒表达效率。另外客户还可选择构建突变UTR系统。具体价格敬请来电咨询。

项目具体价各和实验相关事宜请联系吉玛公司：rnaisupport@genepharma.com，电话：021-51320195-8009。双方协商一致后签订技术服务合同，我们严格按照服务合同开展技术服务。

下单前请务必核对订购表客户信息和订购内容无误，订单一经确认，当天即启动生产。 超过当日17：00后不能修改或者取消，如果需要取消订单，由此产生的费用，将由客户承担。

【取消订单费用规则】

（1）当日17：00前，免费修改或取消。

（2）当日17：00到次日17：00前，按该项产品金额的50%收取。

（3）次日17：00后，按该项产品金额的100%收取。