公司产品

miRNA抑制剂

有效的抑制内源性成熟miRNA功能,21-23 nt 2’-甲氧修饰的RNA寡核酸设计

产品描述

产品特点:

1、有效的抑制内源性成熟miRNA功能

2、21-23 nt 2’-甲氧修饰的RNA寡核酸设计
3、较低的浓度就能高效长久的抑制miRNA活性
4、GMR-miRTM microRNA Inhibitors 是单链的化学修饰的增强型寡核苷酸对sanger miRNA 数据库:http://microrna.sanger.ac.uk中所有人、小鼠以及大鼠miRNA有效

GMR-miRTM microRNA inhibitors的应用:

1、利用GMR-miRTM microRNA inhibitors抑制活体microRNA活性来研究Loss-of-function效应

2、筛选调控基因表达和影响细胞发育过程的miRNAs
3、深入研究miRNA在一些生物过程中的作用,如细胞的发育、增殖、分化和凋亡

4、发现和验证内源性的miRNA target

目录号

产品名称

规格(OD

纯化方式

价格

B03001

GMR-miRTM microRNA inhibitors

2

HPLC

¥350

功能介绍与实验实例

miR-21 inhibitors 实验设计 ,常规Anti-miR-21设计(2’OMe):


As-miR-21: 5’-UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3’

NC:5’-UUGUACUACACAAAAGUACUG-3’

NC-FAM:5’- FAM-UUGUACUACACAAAAGUACUG-3’

全链2’-O-Me修饰。 

二、实验方案 

1. 细胞培养 

293T,A549
7* 10cm dish细胞 
Lipofectamin 2000:250ul
Ezol:50ml
Hairpin-it miR-21 qPCR kit (300runs):1个 

2. 转染效率评价 

A549细胞接种于24孔板,转染Inhibitor-NC FAM优化转染试剂与inhibitor的浓度配比,转染4-6h,荧光显微镜观察转染效率,确定最佳转染条件:

1. Inhibitor:25nM Lipo:1ul 
2. Inhibitor:25nM Lipo:2ul
3. Inhibitor:50nM Lipo:1ul 
4. Inhibitor:50nM Lipo:2ul
5. Inhibitor:100nM Lipo:1ul 
6. Inhibitor:100nM Lipo:2ul




b. miRNA inhibitor转染
inhibitor 3个浓度梯度:25nM,50nM,100nM;NC选择100nM转染。



使用方法

MicroRNA Inhibitor介绍
MicroRNA Inhibitor是用来抑制内源性的MicroRNA的功能。特异的MicroRNA inhibitor能够被导入到表达特异的microRNA的细胞内,抑制MicroRNA的作用,也可以用来抑制表达特异的内源性的miRNA的报告载体的表达。
抑制特异性的内源性的miRNA
为了分析miRNA对生物过程和内源性的靶的作用效果,miRNA inhibitor 能够被转染入细胞评价此效应能否被逆转。
转染程序
转染效率对不同的细胞株和不同的转染试剂是不同的。我们建议miRNA inhibitor 的终浓度为15-100nM
最优化的转染浓度最终还是需要通过试验来确定。我们发现典型的试验中最佳的浓度范围是15-100nM,但是优化的浓度范围我们设定在1-100nM之间。


96孔板 24孔板 12孔板

转染试剂A

0.3-1.0 ul

1-3 ul

2-4 ul

MicroRNA inhibitor B

3 pmol

15 pmol

30 pmol

Cell density C

6000 cells/well

40,000 cells/well

80,000 cells/well

Final volume per well

0.1 ml

0.5 ml

1.0 ml

A:转染试剂的推荐量,根据您订购的试剂不同应做适当的调整
B:所显示的添加量是miRNA inhibitor终浓度为30nM的量。由于最大miRNA inhibitor活性的量在不同的细胞类型是有差异的,所以推荐您自行优化。
C:对细胞密度只是推荐值,不同的细胞株有一定的变化,主要看细胞的大小和生长的状况,一般来说我们推荐细胞融合度在30-70%为佳。


转染优化  

 

优化转染效率是使得miRNA inhibitor 活性最大化的的最关键的一个因素之一,对每种转染试剂而言,首先要确定一款最合适的转染试剂,主要看从以下几点着手处理:

1、转染试剂的量

2、MicroRNA inhibitor的量

3、转染时的细胞密度

4、转染时候的操作顺序

5、细胞与转染试剂/siRNA复合物的接触时间

产品说明书

相关文献

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4.Li X, Liang Q, Zhang W, Li Y, Ye J, Zhao F, Chen X, Wang S. Bio-inspired bioactive glasses for efficient microRNA and drug delivery. Journal of Materials Chemistry B. 2017 Jul.

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6.Sun Y, Xu J, Xu L, Zhang J, Chan K, Pan X, Li G. MiR-503 Promotes Bone Formation in Distraction Osteogenesis through Suppressing Smurf1 Expression. Scientific Reports. 2017 Mar; 7: 409.

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1. RNA干扰研究工具
2. MicroRNA研究工具
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