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CRISPR-Cas9-RNP基因编辑(KO)试剂盒
吉玛基因CRISPR-Cas9-RNP基因编辑(KO)试剂盒是一款基于核糖核蛋白（RNP）复合体递送的全套基因敲除解决方案。该试剂盒采用化学合成的sgRNA与纯化的SpCas9蛋白在体外预先组装成RNP复合体，通过高效转染或电转方式导入细胞，为您提供编辑效率更高、脱靶率更低、细胞毒性更小的精准基因编辑工具。
CRISPR-Cas9基因编辑技术通过向导RNA（gRNA）将Cas9酶靶向至基因组特定序列，造成DNA双链断裂，细胞利用易出错的非同源末端连接（NHEJ）机制进行修复，从而实现基因敲除。
与传统质粒转染方法相比，RNP（Ribonucleoprotein）技术将体外预组装的Cas9蛋白和sgRNA复合体直接递送入细胞，避免了质粒的大小（6-10kb）导致的转染困难，尤其适用于原代细胞等难转染细胞。同时，由于RNP在细胞内存在时间短，可显著减少持续表达Cas9带来的脱靶风险，提高基因编辑的精确性和安全性。
核心优势
- 高效精准：采用优化的RNP递送系统，转染效率高，细胞毒性低，基因编辑效率显著提升，同时有效降低脱靶率。
- 灵活编辑：提供单sgRNA（介导小片段Indel突变）和双sgRNA（介导大片段缺失）两种编辑模式，满足不同的实验需求。
- 即用型套装：试剂盒包含从CRISPR组分（Cas9蛋白、定制sgRNA）、转染试剂到编辑效果鉴定（T7E1检测）的全套模块，实验流程无缝衔接。
- 种属通用：RNP系统不依赖细胞内的转录翻译过程，理论上适用于任何物种的细胞，尤其适用于非人源或难转染细胞的研究。
- 专业支持：提供免费的sgRNA靶点设计服务，并有完整的阳性和阴性对照体系，保障实验顺利进行。
应用场景
• 在哺乳动物细胞系（如HEK-293T）或原代细胞中进行基因功能缺失（Knockout）研究。
• 构建基因敲除的细胞模型，用于功能研究、药物靶点验证等。
• 适用于对转染效率要求高或担心质粒整合、脱靶效应的实验。
产品规格和产品订购
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目录号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
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I05001 |
CRISPR-Cas9-RNP基因编辑(KO)试剂盒 (单sgRNA, 3靶点) |
20T |
￥2,688 |
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I05002 |
CRISPR-Cas9-RNP基因编辑(KO)试剂盒 (单sgRNA, 5靶点) |
20T |
询价 |
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I05003 |
CRISPR-Cas9-RNP基因编辑(KO)试剂盒 (双sgRNA, 3靶点) |
20T |
询价 |
注：以上为促销参考价。价格可能因活动调整，具体请咨询销售代表。试剂盒需根据客户提供的靶基因信息定制sgRNA。
CRISPR-Cas9-RNP基因编辑(KO)试剂盒 (20T) 规格
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目录号 |
编辑模式 |
靶点数目 |
sgRNA条数 |
规格 |
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I05001 |
单sgRNA |
3个靶点 |
3条 |
20T |
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I05001 |
单sgRNA |
5个靶点 |
5条 |
20T |
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I05003 |
双sgRNA |
3个靶点 |
6条 |
20T |
试剂盒详细组分 (20T)
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模块 |
序号 |
组分 |
规格 |
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原料模块 |
1 |
SpCas9蛋白 |
50μg (1μg/μL) *1管 |
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2 |
目标sgRNA（干粉） |
1OD/靶点 * (3/5/6)管 |
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3 |
DEPC水 |
1mL *1管 |
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阳参模块 |
4 |
sgRNA-PC (阳性对照sgRNA) |
0.5OD (干粉) |
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5 |
sgRNA-PC验证底物 (PCR产物) |
20μL *1管 |
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6 |
10x Cleavage buffer |
20μL *1管 |
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转染模块 |
7 |
RNP transmate转染试剂 |
100μL *1管 |
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鉴定模块 |
8 |
T7E1突变检测试剂盒 |
20T *1盒 |
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9 |
鉴定引物序列 |
≤3对/≤5对 (电子版) |
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文本模块 |
10 |
使用说明书 |
1份 |
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11 |
质量报告 (sgRNA质谱，Cas9报告) |
1份 |
保存与运输
- 储存：RNP transmate转染试剂置于2-8℃；其他组分建议-20℃保存，长期使用请分装后-80℃保存。
- 运输：Cas9蛋白、T7E1突变检测试剂盒用干冰运输；其余组分用冰袋运输。
注意事项
- 编辑效率说明：基因编辑效率受靶点可及性、细胞类型、转染效率等多因素影响。对于非人源物种、难转染细胞、客户自行提供sgRNA序列或未使用我司Cas9蛋白的情况，公司不提供编辑效率的有效性承诺与售后服务。建议先在易转染细胞（如HEK-293T）中测试sgRNA效率。
- 实验建议：针对难转染细胞，推荐使用电转法而非化学转染法，以获得更高编辑效率。
- 配套服务：吉玛基因提供免费的sgRNA靶点设计服务，建议一次设计不少于3条sgRNA以筛选高效靶点。
T7E1检测结果案例展示：
示意图说明：使用双sgRNA对某人类基因进行编辑后，T7E1检测结果。野生型条带约700bp，成功编辑的样本显示约600bp的缺失条带（双sgRNA直接缺失）。同时，若存在单一位点编辑，T7E1酶切会产生约300bp和400bp的条带。
体外活性验证案例：
示意图说明：使用试剂盒内的Cas9蛋白、阳参sgRNA-PC与底物PCR产物进行体外切割实验，底物被有效切割，证明试剂盒核心组分具有高活性。
常见问题
- Q: RNP方法与传统的质粒转染法相比，主要优势是什么？
A: 主要优势在于：1) 转染效率更高，尤其适合难转染细胞；2) RNP在细胞内快速降解，显著降低脱靶效应和细胞毒性；3) 编辑速度快，无需等待质粒转录翻译。
- Q: 我应该选择单sgRNA还是双sgRNA试剂盒？
A: 这取决于您的实验目的。如果目的是造成基因功能失活，单sgRNA介导的移码突变通常已足够。如果希望彻底删除某个外显子或功能域，或需要通过PCR片段大小变化快速初筛，则推荐使用双sgRNA。
- Q: 编辑后一定要用T7E1检测吗？可以用测序吗？
A: T7E1是快速、经济评估编辑效率的常用方法。试剂盒已包含T7E1检测组件。如需明确具体的突变序列类型（如缺失多少个碱基），则需要对PCR产物进行Sanger测序，并利用TIDE等在线工具进行分析。测序服务需另行安排。
- Q: 试剂盒可以用来做基因敲入（KI）吗？
A: 本试剂盒主要针对基于NHEJ修复途径的基因敲除（KO）。基因敲入通常需要同源重组修复（HDR）途径，并需提供供体DNA模板。使用本试剂盒进行KO是常规操作，若需进行KI，需额外优化实验体系，建议联系我司技术支持获取方案咨询。
相关产品
- T7E1突变检测试剂盒 (货号: 104006)：单独购买，用于CRISPR编辑效果的通用鉴定。
- gRNA敲除检测PCR试剂盒/引物套装 (货号: 106001-106003)：针对特定gRNA靶点的PCR检测工具，尤其适合双gRNA造成的片段缺失的快速鉴定。
- CRISPR/Cas9基因编辑载体构建系列：提供多种Cas9表达载体、sgRNA克隆载体及病毒包装服务。
- 化学合成sgRNA：单独订购，价格优惠。
- SpCas9蛋白：单独订购，用于客户自建RNP实验体系。
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功能介绍与实验实例
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